Ultrassequenciamento exômico dos principais genes relacionados com a hipercolesterolemia familial / Ultrasequensing exomic of the main genes related to familial hypercholesterolemia

A frequência de Hipercolesterolemia Familial (HF) ainda é desconhecida no Brasil, principalmente pela ausência de estudos com caracterização genotípica associada à fenotípica. Os dados epidemiológicos existentes se baseiam apenas no fenótipos e carecem do diagnóstico molecular confirmatório. O objetivo do presente estudo foi identificar as principais causas genéticas da HF em pacientes diagnosticados fenotipicamente através de um painel exômico com 61 genes a fim de contribuir para um sistema de confirmação do diagnostico molecular em uma amostra da população brasileira. Para isso foram incluídos 141 pacientes, não aparentados, portadores de HF atendidos pelo setor de dislipidemias do Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia, Laboratório de Analises Clinicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal do Rio Grande do Norte e do Programa Hipercol Brasil do Instituto do Coração. As amostras de sangue periférico foram obtidas para determinações fenotípicas laboratoriais e extração de DNA genômico. A biblioteca de DNA foi construída utilizando o kit Nextera® Rapid Capture Enrichment Custom enriquecendo os éxons de 61 genes que direta ou indiretamente estão relacionados com metabolismo do colesterol. O ultrassequenciamento foi realizado utilizando kit MiSeq Reagent (300 a 500 ciclos) na plataforma MiSeq (Illumina). Os resultados de sequenciamento foram inicialmente alinhados a uma sequência referência e analisados para eliminação de falsos positivos, segundo os parâmetros de qualidade, tais como: cobertura mínima de 30x, frequência do alelo alterado maior que 20% e diferença da distribuição das leituras entre as sequências nucleotídicas menor que 15%. Foram identificadas 472 diferentes variantes em 56 dos genes presentes no painel, sendo 45 consideradas como não descritas. Nos genes APOA1, APOA2, LIPC, RBP4 e TIMP1 não foram observadas variantes dentro dos critérios estabelecidos. Das variantes observadas 25 identificadas em 30 (21,2%) pacientes já tinha sido publicadas em relação à HF nos três principais genes (LDLR, APOB e PCSK9), confirmando o diagnóstico. Foi caracterizado genotipicamente outras dislipidemias primárias em 7 pacientes, sem diagnóstico molecular de HF, através de variantes identificadas no ultrassequenciamento em outros genes. Dos 104 pacientes que não possuíam nenhuma variante já previamente caracterizada, 69 possuíam variantes relacionados com o metabolismo do colesterol. As variantes sem patogenicidade conhecida foram avaliadas através de ferramentas de predição in silico e 22 delas possuíam características sugestivas de patogenicidade em pelo menos 4 das ferramentas utilizadas, duas delas também mostraram alterar a estrutura da proteína segundo análises de docking molecular. Foram identificadas também 223 variantes em região não transcritas (UTR). Quando realizada as análises estatística de todas as variantes identificadas, observamos associação de 13 variantes com concentrações mais elevadas de colesterol da LDL, 5 com concentrações mais elevadas de apolipoproteina B-100, 5 com concentrações mais elevadas de colesterol total, 6 com presença de arco córneo, 2 com manifestação de xantelasmas, 2 com ausência de xantomas e 3 com a presença de doença arterial coronariana. Dessas 6 variantes já haviam sido previamente descritas com HF ou algum outro fenótipo associado e 2 não tinham citação na literatura pesquisada, mas possuíam característica patogênica para a proteína segundo as ferramentas de predição in silico. Este estudo permitiu a identificação das causas genéticas da HF em pacientes brasileiros diagnosticados fenotipicamente, mostrando que a técnica escolhida permitiu caracterizar 21,2% dos pacientes. Além disso, foi possível identificar outras dislipidemias primárias e caracterizar algumas variantes que, apesar de necessitarem serem validadas, indicam uma possível associação com a HF, aumentando o esclarecimento do fenótipo com o genótipo para 74,5%. Este estudo também possibilitou a identificação de novas variantes que devem ser avaliadas para confirmar associação com a doença e utilizar para o diagnóstico propondo um novo painel poligênico

The frequency of Familial Hypercholesterolemia (FH) is still unknown in Brazil, mainly due to the absence of studies with genotypic characterization associated with phenotype. Existing epidemiological data are based only on the phenotypes and lack the confirmatory molecular diagnosis. The aim of the present study was to identify main genetic causes of FH in patients diagnosed phenotypically through an exomic panel with 61 genes in order to contribute to a system of confirmation molecular diagnosis in a sample of the Brazilian population. To this end, 141 non-related patients with FH treated by the dyslipidemia sector of the Institute Dante Pazzanese of Cardiology, Clinical Analysis Laboratory of the Faculty of Pharmaceutical Sciences of the University Federal of Rio Grande do Norte and the Hipercol Brazil Program of the Heart Institute. Peripheral blood samples were obtained for laboratory phenotypic determinations and extraction of genomic DNA. The DNA library was constructed using the Nextera® Rapid Capture Enrichment Custom kit, enriching with éxons of 61 genes that are directly or indirectly related to cholesterol metabolism. Ultrasequencing was performed using MiSeq Reagent kit (300 to 500 cycles) on the MiSeq platform (Illumina). The sequencing results were initially aligned to a reference sequence and analyzed for false positive elimination according to quality parameters such as: minimum coverage of 30x, altered allele frequency greater than 20%, and difference in the distribution of reads between sequences nucleotides less than 15%. 472 different variants were identified in 56 of the genes present in the panel, of which 45 were considered not described. In the APOA1, APOA2, LIPC, RBP4 and TIMP1 genes no variants were observed within the established criteria. In 25 of the variants observed presents in 30 (21.2%) patients had already been published in relation to FH in the three main genes (LDLR, APOB and PCSK9), confirming the diagnosis. Other primary dyslipidemias were caracterized genotypically in 7 patients, without molecular diagnosis of HF, through variants identified in ultrasequencing in other genes. Of the 104 patients who did not have any previously characterized variant, 69 had variants related to cholesterol metabolism. The variants without known pathogenicity were evaluated using in silico prediction tools and 22 of them had characteristics suggestive of pathogenicity at least 4 of the tools used, two of them also showed to alter the structure of the protein according to molecular docking analyzes. Were also identified 223 non-transcribed region (UTR) variants. Statistical analysis of all the variants identified showed association of 13 variants with higher concentrations of LDL cholesterol, 5 with higher concentrations of apolipoprotein B-100, 5 with higher concentrations of total cholesterol, 6 with presence of an arc corneal, 2 with manifestation of xanthelasms, 2 with absence of xanthomas and 3 with the presence of coronary artery disease. Of these 6 variants had previously been described with HF or some other associated phenotype and 2 had no citation in the researched literature, but had a pathogenic characteristic for the protein according to in silico prediction tools. This study allowed the identification of the genetic causes of FH in Brazilian patients diagnosed phenotypically, showing that the technique chosen allowed to characterize 21.2% of the patients. In addition, it was possible to identify other primary dyslipidemias and to characterize some variants that, although they need to be validated, indicate a possible association with HF, increasing the clarification of the phenotype with the genotype to 74.5%. This study also allowed the identification of new variants that should be evaluated to confirm association with the disease and to use for the diagnosis proposing a new polygenic panel

Tratamento da hipercolesterolemia: quais os mais importantes produtos de pesquisa? / Hypercholesteromia the most important products being researched?

As estatinas são produtos farmacêuticos de grande sucesso em todo mundo. Entretanto, muitos pacientes, ou por não as tolerarem adequadamente, ou por necessitarem de taxas mais baixas de LDL-colesterol estabelecidas como metas, poderão ter benefícios clínicos com o emprego de novos medicamentos. Numerosas linhas de pesquisa encontram-se em evolução, avaliando produtos com atuação em diferentes vias moleculares: inibidores de síntese da apolipoproteína B, inibidores da DGAT2, da ACAT2, da MTP, da esqualeno sintase, tireoidemiméticos e inibidores da PCSK9. Espera-se, para futuro próximo, a introdução no mercado desses medicamentos, que poderão auxiliar ainda mais na prevenção primária e secundária da doença aterosclerótica coronária, flagelo deste novo século.

Statins are pharmaceutical products that obtained worldwide success. However, some patients with inadequate tolerability to these medications and the need of achieving lower LDL-cholesterol levels as recommended targets, may receive clinical benefits with the use of new drugs. Many research lines have been in evolution evaluating products that act in different molecular pathways: inhibitors of apoliprotein B synthesis, inhibitors of DGAT2, ACAT2, MTP, squalene synthase, thyromimetics, and inhibitors of PCSK9. It is a hope that the future introduction of many of these products on the market will help furthermore primary and secondary prevention of coronary heart disease, a scourge of this new century.

Variabilidade interensaios de dislipidemias em pacientes hipertensos / Inter-assays variability of dislipidemias in hypertensive patients

INTRODUÇÃO E OBJETIVOS: Ensaios de diferentes procedências para avaliação das dislipidemia podem resultar em variações significativas nos resultados obtidos e consequente conduta inadequada pelo clínico. O estudo objetivou comparar resultados laboratoriais de colesterol total (CT), triglicérides (TG), colesterol da lipoproteína de alta densidade (HDL-C), colesterol da lipoproteína de baixa densidade (LDL-C), apolipoproteína A-1 (Apo A-1), apolipoproteína B (Apo B) e lipoproteína (a) (Lp[a]) e índices lipídicos (não-HDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C e Apo B/HDL-C) de pacientes hipertensos e/ou diabéticos diagnosticados. MÉTODOS: Foram utilizados conjuntos reativos, e os respectivos analisadores Gold Analisa, Dia Sys (CCX - Abbott), Dade Behring (Nefelômetro BN 100) e Roche (COBAS Integra 400), para verificar a reprodutibilidade dos resultados obtidos. Participaram 99 pacientes (36 do sexo masculino e 63 do feminino). Comparando os resultados, verificamos que: todas as médias obtidas dos constituintes lipídicos apresentaram diferença significativa; número semelhante de pacientes apresentou níveis séricos elevados de CT, TG, Lp(a) e Apo A-1. O HDL-C, o LDL-C e a Apo B apresentaram discordância, assim como os índices de CT/LDL-C, LDL-C/HDL-C e TG/HDL-C. Para não-HDL-C e ApoB/HDL, houve semelhança no número de pacientes com valores não recomendados. Em consequência da diferença, em relação ao LDL-C, a decisão da conduta terapêutica poderá ser inadequada, enquanto o não-HDL-C, além de evidenciar partículas aterogênicas, apresentou número de hipertensos com valores séricos não referendados semelhantes, independente da metodologia e do equipamento utilizado. CONCLUSÃO: No grupo de hipertensos analisados, o não-HDL-C se caracterizou um importante fator de correção interensaios de parâmetros lipídicos. E sua associação à relação Apo B/HDL-C pode ser um fator adicional em relação às condutas hipolipemiantes a serem adotadas.

INTRODUCTION AND OBJECTIVES: Different assays to evaluate dyslipidemia may show significant variations in the obtained results and a consequent inappropriate clinical approach may be adopted. This study aimed to compare the results of total cholesterol (CT), triglycerides (TG), HDL-C, Apo A1, Apo B, lipoprotein (a) and lipidic indexes (not-HDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C, TG/HDL-C and Apo B/HDL-C) of hypertensive and/or diabetic patients. METHODS: The following reactive kits and respective analyzers were applied to verify the reproducibility of results: Gold Analisa, DiaSys (CCX-ABBOTT), Dade Behring (Nephelometer BN 100) and Roche (COBAS Integra 400). Ninety nine patients (36 male and 63 female gender) were investigated. Comparing the results, we observed that all mean numbers of lipid constituents showed a significant difference. A similar number of patients had high CT, TG, Lp (a) and Apo A-1 serum levels. There was also disagreement in HDL-C, LDL-C, ApoB, CT/LDL-C, LDL-C/HDL-C and TG/HDL-C indexes. For not-HDL-C and ApoB/HDL, there was similarity in the number of patients with not recommended values. As a consequence of this difference, the choice of therapeutic approach may be inappropriate as to LDL-C levels, whereas Not-HDL-C not only showed atherogenic particles but also a number of hypertensive patients with similar not recommended serum values, regardless of the methodology and the equipment used. CONCLUSION: In the analyzed group of hypertensive patients, not-HDL-C was an important inter assay correction factor of lipidic parameters. The association with Apo B/HDL-C relation may be an additional factor as to the choice of hypolipemiant treatments.

Paraoxonase Gene Polymorphism in South-western Korean Population

Paraoxonase (PON) has anti-atherogenic activity. Considering the important role of polymorphism in the genetic susceptibility to cardiovascular disease and the variability of its allele frequencies in different ethnic groups, the distribution of genotypes and allele frequencies of PON1M55L, PON1Q192R, PON2A148G, and PON2S311C polymorphisms was analyzed in a total 988 South-western Koreans and determined their effects on lipid parameters. The genotype distribution of PON1 at position 55 was LL=0.886, LM=0.114; and at position 192 was QQ=0.406, QR=0.594. The frequencies of the PON1 55L allele and the PON1 192R allele were similar to those seen in Chinese populations and Western populations, respectively. The genetic distribution of PON2 at position 148 was AA=0.619, AG=0.345, GG=0.035; and at position 311 was CC=0.035, SC=0.345, SS=0.619. The frequencies of the PON2 148G and 311S alleles were similar to those seen in Chinese populations. The concentrations of LDL and ApoB were significantly different between the PON2A148G (P<0.05) and PON2 S311C polymorphisms (P<0.01). PON polymorphisms and allele frequencies were described in Koreans living south-western part of Korea. These ethnic variations are considered important in the interpretation of diseases associated with PON polymorphisms.

Estudo de parâmetros bioquímicos e biológicos no hipotireoidismo sub-clínico / Study of biochemical and biological parameters in subclinical hypothyroidism

O objetivo deste trabalho foi o estudo de parametros bioquimicos (homocisteina,Lp(a), ApoA e ApoB) e biologicos (dilatação arterial endotélio dependente e dilatação arterial após nitrato sublingual) em mulheres com hipotireoidismo sub-clinico;nas pacientes que apresentaram alteração nos parametros biologicos foram estudados novamente todos os parametros,bioquimicos e biologicos após o tratamento com levotiroxina.Os resultados mostraram alteração na dilatação arterial endotélio / The objective of this work was to study biochemical ( homocysteine,Lp(a),ApoA and ApoB) and biological ( endothelium-dependent arterial dilation and arterial dilation after sublingual nitrate) parameters in women with subclinical hypothyroidism;in patients with abnormal biological parameters,biochemical and biological parameters were studied again after levothyroxine therapy.Results show abnormal endothelium-dependent arterial dilation...

Importance of screening the peripheral smear.

A 5-year-old boy presented with history of failure to thrive from infancy. There was a history of one sibling death due to similar problems and history of severe abortions in the mother. Routine examination of peripheral smear revealed more than 50% acanthocytes. Based on this tests were streamlined to doing lipid profile and Lipo protein electrophoresis which revealed hypolipidemia and absent beta hypo protein band. Jejunal mucosal biopsy confirmed the diagnosis of A Beta Lipo proteinemia which revealed lipid laden enterocytes. This case illustrates the importance of simple tests like peripheral smear examination in streamlining further tests in the diagnosis of major diseases.

Comparative assssment of three commercially available methods for measurement of serum apolipoproteins A-1 and B

The aim of the study was to establish a reliable and cost-effective method of assessing apolipoprotein levels in a Kuwaiti teaching hospital Lipid Clinic population. Plasma levels of apo A-I and B were assayed in 88 subjects by each of the following 3 immunological methods: [1] Behring's nephelometry with dedicated reagents; [2] turbidimetry on a Hitachi 911 Autoanalyser using reagents from Boehringer; and [3] manual turbidimetry with Randox reagents. For both apo A-I and B, the levels obtained were consistently highest for method 1, lowest for method 3, and intermediate for method 2. With regards to apo A-I, the differences were statistically significant for 2 and 3 vs. I [p <0.001], but not between 2 and 3. For apo B, values obtained for methods I and 2 were similar statistically but significantly higher than those from method 3 [p < 0.01]. The correlation between values for apo A-I and apo B obtained by the three methods demonstrated a similar trend: for apo A-I, the correlation coefficients were greatest [r 0.75] for method 1/2, and less for 1/3 [r 0.64] and 2/3 [r 0.62]; for apo B, the correlation for 1/2 [r 0.74] was greater than for 1/3 [r 0.43] and 2/3 [r 0.69] [all p <0.001]. Altman and Bland plots indicated -20% bias for apo A-I and apo B between methods I and 2, much smaller than the -20%->100% range for 1/3 and 2/3 for both apoproteins. Similarly concordance for diagnostic values of apo A-I [<1.20 g/l] and apo B [>1.20 g/l] were best for methods 1 and 2. In economic terms, assays for either apo A-I or apo B cost about $3.00 for methods 1 and 2, with a similar technician time/sample of about 2 minutes; for 3, the cost is less [about $2.25], but technician time/sample was about doubled. The study suggests that measured apo A-I and B levels may differ depending on the type of commercial kits used, making it imperative for each laboratory to establish its own reference range. Caution should be exercised in inter-laboratory comparisons of data on apo A-I and B, particularly as applied to patient care

ApoA-I, ApoB y su relación en obesidad infantil: estudio preliminar / Serum apolipoproteins A-I, Apo-Band the ratio Apo A-I/ApoB in obese children: preliminary study

El objetivo de este trabajo es analizar la potencial utilidad de la determinación del nivel sérico de Apoproteína A-I (ApoA-I), Apoproteína B (ApoB) y su relación (ApoA-I/ApoB) como indicadores de riesgo aterogénico, en la obesidad infantil. Para ello se determinaron dichas fracciones, en muestras extraídas en ayunas, en un grupo de 46 escolares obesos según criterio de Peso/Talla y sin patología agregada, por inmunodifusión radial cuantitativa sobre placas (Diffu-Plate). Como valores de referencia se utilizaron los reportados por Feliu-Slobodianik para niños clínicamente sanos de igual edad. Los resultados obtenidos (mg/dL) fueron: ApoA-I = 152,5 ñ 29,3; ApoB = 116,5 ñ 32,7; siendo la relación ApoA-I?ApoB = 1,4 ñ 0,5. Al comparar estos resultados con los respectivos valores de referencia (129,5 ñ 19,9; 83,1 ñ 19,6; 1,7 ñ 0,5), se observó aumento significativo (p < 0,001) en el nivel de las apoproteínas séricas con disminución en su relación; al expresar los resultados como por ciento del valor de referencia, el 95 por ciento de los niños presentó valores superiores al 100 por ciento para estas fracciones; el colesterol total (184,3 ñ 31,7) se encontró por debajo del 95 percentilo según sexo y edad; sólo un 5 por ciento de la población estudiada presentó valores de HDL inferiores al rango de referencia (46,4 ñ 12,6). El aumento en ApoB, apoproteína ligada a LDL está corroborando bioquímicamente, que la obesidad ubica a la población estudiada dentro de las de alto riesgo aterogénico, ratificando la importancia y urgencia del manejo nutricional racional y controlado de este grupo infantil. Por esto, la determinación de ApoB y la relación ApoA-I/ApoB podrían considerarse de utilidad en el seguimiento y control del tratamiento dietoterápico en esta patología nutricional

Anti-atherogenic effect of circylating immune complexes in schistosomal hepatic fibrosis

This study included 29 normal control subjects and 76 SHF patients [33 with portosystemic collaterals, 12 with portosystemic collaterals and atherosclerosis, 18 without collaterals and 13 without collaterals with atherosclerosis]. Precipitation of circulating immune complexes [CICs] by ammonium sulfate at 25% saturation and estimation by nephelometry of CICs fractions; namely, immunoglobulins IgG, IgA, IgM, complement C3, apolipoproteins apoA and apoB were done for each subject. Patients with collaterals showed the highest levels of CICs, the atherosclerotic SHF without collaterals showed the lowest level. A similar pattern was shown for the total contents of IgG, IgA, IgM, apoxe A and B fractions of their CICs. Contrarily was the C3 fraction of the CICs which was generally low in the SHF Groups, except in the atherosclerotic group without collaterals who showed an astonishingly high level explaining the ability of their CICs to elicit immune endothelial injury

Blocking of alcohol-induced effects on synthesis and secretion of apo B containing lipoproteins by substituting sardine oil in the diet.

The effect of substitution of fish oil in the diet on the alcohol-induced changes in the metabolism of very low density lipoprotein (VLDL) by primary cultures of rat hepatocytes has been studied. Rats fed groundnut oil diet or sardine oil diet were given alcohol (3 g/kg) for 4 weeks. Substitution of fish oil for groundnut oil in the diet blocked the hypertriglyceridemia and hyperlipoproteinemia caused by alcohol. Enhanced incorporation of [3H]leucine into apo B secreted into the medium and [14C]acetate into lipids associated with secreted VLDL indicated an increased rate of synthesis of apo B containing lipoproteins by hepatocytes from livers of rats receiving alcohol. Fish oil in the diet reduced incorporation of [3H]leucine into apo B and that of [14C]acetate into lipids indicating a lower rate of synthesis of apo B containing lipoproteins. Pulse chase experiments confirmed the above observation. Thus it is suggested that fish oil in the diet prevents hyperlipoproteinemia caused by alcohol possibly by reducing the synthesis and secretion of VLDL by liver.

Morbilidad cardiovascular y prevalencia de factores de riesgo en un consultorio del médico de la familia del Cerro / Cardiovascular morbidity and prevalence of risk factors in a family doctor's home-office of Cerro municipality

Con el propósito de determinar la mortalidad cardiovascular y la prevalencia de sus principales factores de riesgo, se estudió una muestra probalística estratificada según edad y sexo de 66 familias, en el consultorio 30 en el área de salud del Cerro durante el año 1991. Los factores de riesgo más frecuentes fueron el sedentarismo, la hipertensión arterial y el hábito de fumar. Las alteraciones lipídicas más frecuentes fueron el incremento de la apolipoproteína B y del colesterol total. El estrés medio subjetivo evidenció cifras muy bajas. La localización cardíaca de la aterosclerosis fue la más frecuente. Se debe de incrementar el conocimiento en las esferas cognoscitiva y conativa de la población estudiada, para poder controlar la aterosclerosis en este consultorio.

Apoliproteínas A-I y B-100 y enfermedad coronaria comprobada angiográficamente

Objetivo : establecer la correlación de las apolipoproteínas (APO) A-I y B-100 séricas , con la enferemdad coronaria (EC) y su severidad. Método: estudio abierto, prospectivo y análitico en 52 pacientes sometidos a angiocoronariografía de abril a septiembre de 1991, tomando previamente muestra de sangre para medición de colesterol (CT), triglicéridos (TG), HDL, APO-AI y APO B-100 y determinación de LDL, índice aterogénico (IA), LDL/HDL y relación APO A1/B-100. Sitio : Servicio universitario de referencia de pacientes de atención terciaria. Principales resulatdos : 65.4 por ciento de los pacientes fueron hombres y 34.6 por ciento, mujeres; 67.3 por ciento tenían EC y 32.7 por ciento nola tenían. Entre los grupos con y sin EC hubo diferencia significativa en todas las variables medidas, especialmente en el CT, cuya media era de 210+-51 mg por ciento en el grupo sin EC y de 255+-48 mg por ciento en el grupo con EC (p=0.0006), y en la relación APO-AI/B-100, que fue de 2.08+-0.49 para el grupo sin EC y de 1.18+-0.51 para elgrupo con EC (p=0001). Entre hombres y mujeres fueron significativamente diferentes las la APO-AI (p=0.004) y la relación APO-AI/B-100 (p=0.003). Ninguna variable diferenció el grupo con EC leve del grupo sin EC, pero sí diferenciaron la ausencia de EC de lapresencia de EC moderada y severa el CT, APO-AI, APO-AI/B-100, IA y LDL/HDL. En la regresión lineal el grado EC pependió significativamente de APO-AI/B-100 (r=0.73, p<0.001), APO-B-100 (r+0.60, p<0.001), LDL/HDL (r=0.51, p<0.001) y CT (r=0.50, p=<0.001). En la regresión múltiple la presencia de EC dependió de la relación APO-AI/B-100 (r=0.73) y del colesterol total (r=0.50). Conclusiones : el índice APO-AI/B-100 mejoró de manera importante la correlación con la presencia de EC con respecto a las demás variables, no así la medición de APO-AI y B-100 por separado. Esta misma relación no discriminó la ausencia de EC de la EC leve, pero si la ausencia de EC de la EC moderada y severa.

Aterosclerosis coronaria: evaluación de parámetros biomédicos para la detención de individuos de alto riesgo / Coronary atherosclerosis: evaluation of biomedical parameters for the detection of individuals at high risk

El objeto del estudio fue determinar un conjunto de parámetros clínicos y bioquímicos, que permita identificar mejor los afectados de aterosclerosis coronaria aún sin signos o síntomas clínicos a confirmar el alto riesgo en un sujeto determinado. Se analizaron 45 varones afectados de aterosclerosis coronaria (EC), de 45 años y más y 42 varones controles "aparentemente sanos" (CTR). Se observaron diferencias significativas para: Antecedentes familiares de enfermedad coronaria antes de los 55 años (AF), 51% vs 2% (P < 0,001); H.T.A., 49% vs 21% (P<0,01); el hábito de fumar (Cig), 71% vs 57% (p < 0,05); glucosa, en EC 101 ñ 22 y en CTR 93 ñ 9 mg/dl (P < 0,05); AcU 6,0 ñ 1,2 vs 5,3 ñ 1,1 (P < 0,001);tg 169 ñ 104 VS 134 ñ 66mg/dl (P < 0,05); Apo B total 132 ñ 33 vs 114 ñ 24 mg/dl (P < 0,01); CHDL 41 ñ 10 vs 49 ñ 13 (P < 0,001); CT/CHDL 5,9 ñ 1,6 vs 4,8 ñ 1,4 (P < 0,001); CLDL/CHDL 4,0 ñ 1,1 vs 3,3 ñ 1,2 (P < 0,01); Apo A-I/Apo B 1,0 ñ 1,0 ñ 0,3 vs 1,2 ñ 0,3 (P < 0,01) y Apo B/CHDL 3,4 ñ 1,1 vs 2,5 ñ 0,8 (P < 0,001), respectivamente. Diabetes Tipo II, 4% en EC. La sensibilidad fue: CLDL/CHDL > 3,0 89% CT/CHDL > 4,5, 82% y Apo B/CHDL > 2,6, 76%; la especificidad de Apo B < 1,0, 74%; el poder predictivo positivo de los indicadores de riesgo fue aproximadamente 65%. Mediante Análisis Lineal Discriminante con 12 variables bioquímkicas se clasificó correctamente el 74% de EC y 74% de CTR. Si se incluye AF, Cig y la H.T.A., se clasificó correctamente el 86% de los EC. Se concluye que para la confirmación de alto riesgo para la aterosclerosis coronaria en un sujeto determinado o en la detección de enfermos sin signos o síntomas clínicos, debería incluirse: AF, Cig, H.T.A., Apo B total > 120 mg/dl, C-HDL > 35 mg.dl y los indicadores de riesgo CT/CHDL > 4,5 CLDL/CHDL > 3,0, Apo B/C-HDL > 2,6, Apo A-I/Apo B < 1,0, C-LDL < 160 mg/dl con Apo B > 120 mg/dl y C-LDL/ Apo B < 1,3

Proyecto de estandarización para la medición de apolipoproteínas A-I y B: II evaluación y selección de candidatos a materiales de referencia / Proyect of standarization for the measurement of apolipoproteins A-I y B: evaluation and selection of candidates by material of reference

La primera fase de un estudio internacional en colaboración para estandarizar sistemas de análisis para la medición de apo A-I y B, demostró que la uniformidad de tales mediciones puede conseguirse si se usan materiales de referencia comunes, adecuados para calibrar los distintos sistemas. Durante esta fase, varios candidatos a materiales de referencia fueron seleccionados para una posterior evaluación como materiales de referencia internacionales. El objetivo de la segunda fase del estudio, fue evaluar la linealidad y el paralelismo o proporcionalidad de los candidatos a materiales seleccionados en la fase 1, y determinar si alguno de ellos puede proponerse como material de referencia internacional. Para evaluar los materiales de referencia propuestos, fueron usados 37 sistemas de análisis, para apo A-I y 38 para apo B, abarcando a 23 fabricantes y 5 laboratorios de investigación. Para apo A-I fueron propuestas 2 preparaciones liofilizadas, SP1 de Behringwerke AG, Alemania, y SP2 de Daiichi Pure Chemicals Co, Japón; y para apo B, se propusieron 2 preparaciones líquidas, SP3 de Behringwerke AG, Alemania y SP4 de Reagents Applications, USA. La linealidad de los candidatos a materiales de referencia fue comparada con la de un pool de sueros frescos congelados, o materiales de referencia sérico provisorio (MRSP), distribuido a todos los participantes y con la de un pool de suero fresco (PSF), preparado por cada participante. El C.V. total entre laboratorios, después de una calibración uniforme, medido sobre 6 muestras de sueros normolipémicos, fue cerca del 6%para apo A-I y alrededor del 7%para apo B. Los candidatos a materiales de referencia SP1 y SP3 exhibieron linealidad y paralelismo similar al del pool de suero fresco congelado y tenían CVs interlaboratorio menores o similares a los obtenidos en muestras de suero normolipémicos. Por lo tanto, estos dos materiales fueron seleccionados como candidatos internacionales a materiales de referencia

Proyecto de estandarización para medición de apolipoproteínas A-I y B: III Comparabilidad de los valores de Apo-I por el uso de material de referencia internacional / Proyect of standarization for measurement of apolipoproteins: comparability of the values of Apo-I for the use of material of reference international

En la Tercera Fase del estudio de la IFCC para la estandarización de la medición de apolipoproteína apo A-I fue investigada la preparación de SP1-01, seleccionada como candidata a material de referencia internacional para apo A-I, según su capacidad para transferir un valor basado en la exactitud a los calibradores de los inmunoensayos, y en producir comparabilidad de los valores en muestras de pacientes. Se asignó un valor de apo A-I de 1,50 g/L al SP1-01, mediante un radioinmunoensayo estandarizado, calibrado con apo A-I purificada, con un valor de masa determinado por análisis de aminoácidos. De acuerdo a un detallado protocolo en común, los participantes transfirieron el valor de masa del SP1-01 al calibrador de cada método. Cada laboratorio analizó 50 muestras de sueros frescos congelados, de individuos donantes, siguiendo un procedimiento similar al adoptado por el Cholesterol Reference Laboratory Network para confirmar que la uniformidad de la calibración asegura la comparabilidad de los valores sobre un amplio rango de valores de apo A-I. El valor medio consensuado sobre cada muestra estuvo en excelente concordancia con el valor asignado por el Northwest Lipid Research Laboratories, con la desviación absoluta promedio entre el valor asignado y el consensuado de 0.01 g/L. El CV interlaboratorios sobre cada una de las 50 muestras tuvo rangos entre 2.1%y 5.6%con un CV%promedio de 3.6%, demostrando que pueden obtenerse resultados de apo A-I comparables por una variedad de métodos inmunoquímicos, mediante el uso de materiales de referencia certificados. Sobre la base de los resultados obtenidos en estos estudios, el SP1-01 ha sido aprobado como material de referencia internacional por la Organización Mundial de la Salud

Detección de Apo B en lipoproteínas peroxidadas con un anticuerpo monoclonal / Detection of Apo B in peroxidated lipoproteins with a monoclonal antibody

Se desarrolló un sistema ELISA para Apo B empleando el AcM IA/CB-VLDVL.1 como anticuerpo de captura y anticuerpos policlonales de cabra anti Apo B, conjugados con HRP. Este sistema detecta valores superiores de Apo B luego de tratar las muestras con malondialdehído o sulfato cúprico, o luego de la incubación del LDL con células humanas endoteliales en cultivo. El IA/CB-VLDL.1 también reconoce niveles incrementados de Apo B en muestras de suero que han sido incubadas alta temperatura y en presencia de sustancias oxidativas, tales como ázida sódica. Las sustancias antioxidantes como EDTA disminuyen el reconocimiento del determinante antigénico identificado por el AcM IA/CB-VLDL.1. tanto la anbímina humana oxidada, las HDL como la LDL licosiladas no son reconocidas por este AcM. Los niveles de Apo B detectados por el IA/CB-VLDL.1 se correlacionan con los lipoperóxidos en LDL y VLDL alterados con lipoxigenasa en presencia de acidos grasos libres. Este sistema ELISA detectó niveles de Apo B incrementados en muestras de suero de pacientes con aterosclerosis periférica, angiopatía diabética y cardipatía isquémica, con respecto a los sueros de los individuos de distribución de edad y sexo similares, sin manifestaciones clínicas o antecedentes de enfermedad aterosclerótica

Modificaciones de algunas variables bioquímicas e inmunológicas en pacientes con evidencias de infección durante el embarazo o sin esta / Modifications of some biochemical and immunologic variables in patients with and withoud evidences at infection during pregnancy

Se estudiaron l52 muestras de suero gestantes en el momento del parto con sus respectivos sueros de sangre del cordón umbilical. A los sueros se les determinó: colesterol total, apoliproteína B, inmunoglobulinas G, M y A y transferrina. Se establecieron los valores de referencia para estas variables en nuestras condiciones de laboratorio, se escogieron las muestras de pacientes sanas, sin evidencias de enfermedades crónicas, con edad gestacional mayor de 38 semanas y se excluyó a las fumadoras. El grupo de pacientes que se estudió durante el embarazo se dividió en: exudados vaginales positivos, sepsis urinaria, rotura prematura de membranas (> de 24 horas) y fiebre intraparto. Estos valores fueron comparados por la prueba t-student con los encontrados en el grupo control. Se obtuvieron diferencias significativas para las categorías de fiebre intraparto y rotura prematura de membranas en varias de las variables estudiadas.